വാണിജ്യാടിസ്ഥാനത്തിലുള്ള സൈപ്പർമെത്രിൻ തയ്യാറെടുപ്പുകളുടെ ചെറിയ ജല ടാഡ്‌പോളുകളുടെ മരണനിരക്കും വിഷാംശവും.

വാണിജ്യാടിസ്ഥാനത്തിലുള്ള വസ്തുക്കളുടെ മാരകത, മാരകത, വിഷാംശം എന്നിവ ഈ പഠനം വിലയിരുത്തി.സൈപ്പർമെത്രിൻഅനുരൻ ടാഡ്‌പോളുകൾക്കുള്ള ഫോർമുലേഷനുകൾ. അക്യൂട്ട് ടെസ്റ്റിൽ, 96 മണിക്കൂറിനുള്ളിൽ 100–800 μg/L സാന്ദ്രത പരിശോധിച്ചു. ക്രോണിക് ടെസ്റ്റിൽ, സ്വാഭാവികമായി സംഭവിക്കുന്ന സൈപ്പർമെത്രിൻ സാന്ദ്രത (1, 3, 6, 20 μg/L) മരണനിരക്ക് പരിശോധിച്ചു, തുടർന്ന് മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസ് പരിശോധനയും 7 ദിവസത്തേക്ക് ചുവന്ന രക്താണു ന്യൂക്ലിയർ അസാധാരണത്വങ്ങളും നടത്തി. ടാഡ്‌പോളുകളിലേക്കുള്ള വാണിജ്യ സൈപ്പർമെത്രിൻ ഫോർമുലേഷന്റെ LC50 273.41 μg L−1 ആയിരുന്നു. ക്രോണിക് ടെസ്റ്റിൽ, ഏറ്റവും ഉയർന്ന സാന്ദ്രത (20 μg L−1) 50% ത്തിൽ കൂടുതൽ മരണനിരക്കിന് കാരണമായി, കാരണം ഇത് പരീക്ഷിച്ച ടാഡ്‌പോളുകളിൽ പകുതിയോളം കൊന്നു. മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസ് ടെസ്റ്റ് 6, 20 μg L−1 എന്നിവയിൽ കാര്യമായ ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു, കൂടാതെ നിരവധി ന്യൂക്ലിയർ അസാധാരണത്വങ്ങൾ കണ്ടെത്തി, ഇത് വാണിജ്യ സൈപ്പർമെത്രിൻ ഫോർമുലേഷന് പി. ഗ്രാസിലിസിനെതിരെ ജനിതക വിഷബാധ സാധ്യതയുണ്ടെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. സൈപ്പർമെത്രിൻ ഈ ജീവിവർഗത്തിന് ഉയർന്ന അപകടസാധ്യതയുള്ളതാണ്, ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് ഇത് ഒന്നിലധികം പ്രശ്നങ്ങൾക്ക് കാരണമാകുമെന്നും ഹ്രസ്വകാല, ദീർഘകാലാടിസ്ഥാനത്തിൽ ഈ ആവാസവ്യവസ്ഥയുടെ ചലനാത്മകതയെ ബാധിക്കുമെന്നും ആണ്. അതിനാൽ, വാണിജ്യ സൈപ്പർമെത്രിൻ ഫോർമുലേഷനുകൾക്ക് പി. ഗ്രാസിലിസിൽ വിഷാംശം ഉണ്ടെന്ന് നിഗമനം ചെയ്യാം.
കാർഷിക പ്രവർത്തനങ്ങളുടെ തുടർച്ചയായ വികാസവും തീവ്രമായ പ്രയോഗവും കാരണംകീട നിയന്ത്രണംജലജീവികൾ പലപ്പോഴും കീടനാശിനികൾക്ക് വിധേയരാകുന്നു1,2. കാർഷിക മേഖലകൾക്ക് സമീപമുള്ള ജലസ്രോതസ്സുകളുടെ മലിനീകരണം ഉഭയജീവികൾ പോലുള്ള ലക്ഷ്യമില്ലാത്ത ജീവികളുടെ വികാസത്തെയും നിലനിൽപ്പിനെയും ബാധിക്കും.
പരിസ്ഥിതി മാട്രിക്സുകളുടെ വിലയിരുത്തലിൽ ഉഭയജീവികൾക്ക് കൂടുതൽ പ്രാധാന്യമുണ്ട്. സങ്കീർണ്ണമായ ജീവിത ചക്രങ്ങൾ, ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ലാർവ വളർച്ചാ നിരക്ക്, ട്രോഫിക് അവസ്ഥ, പ്രവേശനക്ഷമതയുള്ള ചർമ്മം 10,11, പുനരുൽപാദനത്തിനായി വെള്ളത്തെ ആശ്രയിക്കൽ 12, സുരക്ഷിതമല്ലാത്ത മുട്ടകൾ 11,13,14 എന്നിങ്ങനെയുള്ള സവിശേഷ സവിശേഷതകൾ കാരണം അനുരാനുകളെ പരിസ്ഥിതി മലിനീകരണത്തിന്റെ നല്ല ബയോഇൻഡിക്കേറ്ററുകളായി കണക്കാക്കുന്നു. സാധാരണയായി വീപ്പിംഗ് ഫ്രോഗ് എന്നറിയപ്പെടുന്ന ചെറിയ ജല തവള (ഫിസലേമസ് ഗ്രാസിലിസ്) കീടനാശിനി മലിനീകരണത്തിന്റെ ഒരു ബയോഇൻഡിക്കേറ്റർ ഇനമാണെന്ന് തെളിയിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്4,5,6,7,15. അർജന്റീന, ഉറുഗ്വേ, പരാഗ്വേ, ബ്രസീൽ1617 എന്നിവിടങ്ങളിൽ നിൽക്കുന്ന ജലാശയങ്ങളിലോ സംരക്ഷിത പ്രദേശങ്ങളിലോ വേരിയബിൾ ആവാസ വ്യവസ്ഥയുള്ള പ്രദേശങ്ങളിലോ ഈ ഇനം കാണപ്പെടുന്നു, കൂടാതെ വ്യത്യസ്ത ആവാസ വ്യവസ്ഥകളുടെ വിശാലമായ വിതരണവും സഹിഷ്ണുതയും കാരണം IUCN വർഗ്ഗീകരണം ഇതിനെ സ്ഥിരതയുള്ളതായി കണക്കാക്കുന്നു18.
സൈപ്പർമെത്രിന് വിധേയമായതിനെത്തുടർന്ന് ഉഭയജീവികളിൽ മാരകമല്ലാത്ത ഫലങ്ങൾ റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്, അവയിൽ ടാഡ്‌പോളുകളിലെ പെരുമാറ്റപരവും രൂപപരവും ജൈവ രാസപരവുമായ മാറ്റങ്ങൾ23,24,25, മരണനിരക്കിലും രൂപാന്തര സമയത്തിലുമുള്ള മാറ്റങ്ങൾ, എൻസൈമാറ്റിക് മാറ്റങ്ങൾ, വിരിയിക്കുന്നതിന്റെ വിജയം കുറയൽ24,25, ഹൈപ്പർ ആക്ടിവിറ്റി26, കോളിനെസ്റ്ററേസ് പ്രവർത്തനത്തിന്റെ തടസ്സം27, നീന്തൽ പ്രകടനത്തിലെ മാറ്റങ്ങൾ7,28 എന്നിവ ഉൾപ്പെടുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഉഭയജീവികളിൽ സൈപ്പർമെത്രിന്റെ ജനിതക വിഷ ഫലങ്ങളെക്കുറിച്ചുള്ള പഠനങ്ങൾ പരിമിതമാണ്. അതിനാൽ, അനുരൻ സ്പീഷീസുകളുടെ സൈപ്പർമെത്രിനുള്ള സംവേദനക്ഷമത വിലയിരുത്തേണ്ടത് പ്രധാനമാണ്.
പരിസ്ഥിതി മലിനീകരണം ഉഭയജീവികളുടെ സാധാരണ വളർച്ചയെയും വികാസത്തെയും ബാധിക്കുന്നു, എന്നാൽ ഏറ്റവും ഗുരുതരമായ പ്രതികൂല ഫലം കീടനാശിനികളുടെ സമ്പർക്കം മൂലം ഡിഎൻഎയ്ക്ക് ഉണ്ടാകുന്ന ജനിതക നാശമാണ്13. രക്തകോശ രൂപാന്തര വിശകലനം മലിനീകരണത്തിന്റെയും വന്യജീവികൾക്ക് ഒരു വസ്തുവിന്റെ സാധ്യതയുള്ള വിഷാംശത്തിന്റെയും ഒരു പ്രധാന ജൈവസൂചകമാണ്29. പരിസ്ഥിതിയിലെ രാസവസ്തുക്കളുടെ ജനിതകവിഷബാധ നിർണ്ണയിക്കുന്നതിനുള്ള ഏറ്റവും സാധാരണയായി ഉപയോഗിക്കുന്ന രീതികളിൽ ഒന്നാണ് മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസ് പരിശോധന30. ഉഭയജീവികൾ പോലുള്ള ജീവികളുടെ രാസമലിനീകരണത്തിന്റെ നല്ല സൂചകമായ ഇത് വേഗതയേറിയതും ഫലപ്രദവും ചെലവുകുറഞ്ഞതുമായ ഒരു രീതിയാണ്31,32 കൂടാതെ ജനിതകവിഷ മലിനീകരണങ്ങളുമായുള്ള സമ്പർക്കത്തെക്കുറിച്ചുള്ള വിവരങ്ങൾ നൽകാൻ കഴിയും33.
മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസ് പരിശോധനയും പാരിസ്ഥിതിക അപകടസാധ്യത വിലയിരുത്തലും ഉപയോഗിച്ച് ചെറിയ ജല ടാഡ്‌പോളുകളിൽ വാണിജ്യ സൈപ്പർമെത്രിൻ ഫോർമുലേഷനുകളുടെ വിഷ സാധ്യത വിലയിരുത്തുക എന്നതായിരുന്നു ഈ പഠനത്തിന്റെ ലക്ഷ്യം.
പരിശോധനയുടെ നിശിത കാലയളവിൽ വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതയിലുള്ള വാണിജ്യ സൈപ്പർമെത്രിന് വിധേയമാകുന്ന പി. ഗ്രാസിലിസ് ടാഡ്‌പോളുകളുടെ സഞ്ചിത മരണനിരക്ക് (%).
ഒരു ക്രോണിക് പരിശോധനയിൽ വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതയിലുള്ള വാണിജ്യ സൈപ്പർമെത്രിന് വിധേയമാകുന്ന പി. ഗ്രാസിലിസ് ടാഡ്‌പോളുകളുടെ സഞ്ചിത മരണനിരക്ക് (%).
വ്യത്യസ്ത സാന്ദ്രതയിലുള്ള സൈപ്പർമെത്രിന് (6 ഉം 20 μg/L ഉം) വിധേയമാകുന്ന ഉഭയജീവികളിൽ ജനിതക വിഷാംശം മൂലമാണ് ഉയർന്ന മരണനിരക്ക് ഉണ്ടായതെന്ന് നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടിട്ടുണ്ട്. മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസുകളുടെ (MN) സാന്നിധ്യവും ചുവന്ന രക്താണുക്കളിലെ ന്യൂക്ലിയർ അസാധാരണത്വങ്ങളും ഇതിന് തെളിവാണ്. മൈറ്റോസിസിലെ പിശകുകളെയാണ് MN ന്റെ രൂപീകരണം സൂചിപ്പിക്കുന്നത്, കൂടാതെ ക്രോമസോമുകളെ മൈക്രോട്യൂബുലുകളുമായി ബന്ധിപ്പിക്കുന്നതിൽ ഉണ്ടാകുന്ന മോശം അവസ്ഥ, ക്രോമസോം ആഗിരണം, ഗതാഗതം എന്നിവയ്ക്ക് കാരണമാകുന്ന പ്രോട്ടീൻ കോംപ്ലക്സുകളിലെ തകരാറുകൾ, ക്രോമസോം വേർതിരിക്കലിലെ പിശകുകൾ, DNA കേടുപാടുകൾ പരിഹരിക്കുന്നതിലെ പിശകുകൾ എന്നിവയുമായി ഇത് ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കുന്നു. കൂടാതെ കീടനാശിനികൾ മൂലമുണ്ടാകുന്ന ഓക്സിഡേറ്റീവ് സമ്മർദ്ദവുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കാം. വിലയിരുത്തിയ എല്ലാ സാന്ദ്രതകളിലും മറ്റ് അസാധാരണത്വങ്ങൾ നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടു. സൈപ്പർമെത്രിൻ സാന്ദ്രത വർദ്ധിക്കുന്നത് ഏറ്റവും കുറഞ്ഞ (1 μg/L) ഡോസുകളിലും ഉയർന്ന (20 μg/L) ഡോസുകളിലും ചുവന്ന രക്താണുക്കളിലെ ന്യൂക്ലിയർ അസാധാരണത്വങ്ങൾ യഥാക്രമം 5% ഉം 20% ഉം വർദ്ധിപ്പിച്ചു. ഉദാഹരണത്തിന്, ഒരു ജീവിവർഗത്തിന്റെ ഡിഎൻഎയിലെ മാറ്റങ്ങൾ ഹ്രസ്വകാല, ദീർഘകാല അതിജീവനത്തിന് ഗുരുതരമായ പ്രത്യാഘാതങ്ങൾ ഉണ്ടാക്കും, ഇത് ജനസംഖ്യ കുറയുന്നതിനും, പ്രത്യുൽപാദന ക്ഷമതയിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നതിനും, ഇൻബ്രീഡിംഗിനും, ജനിതക വൈവിധ്യത്തിന്റെ നഷ്ടത്തിനും, കുടിയേറ്റ നിരക്കുകളിൽ മാറ്റം വരുത്തുന്നതിനും കാരണമാകും. ഈ ഘടകങ്ങളെല്ലാം ജീവിവർഗങ്ങളുടെ നിലനിൽപ്പിനെയും പരിപാലനത്തെയും സ്വാധീനിക്കും42,43. എറിത്രോയിഡ് അസാധാരണത്വങ്ങളുടെ രൂപീകരണം സൈറ്റോകൈനിസിസിലെ ഒരു തടസ്സത്തെ സൂചിപ്പിക്കാം, ഇത് അസാധാരണമായ കോശവിഭജനത്തിന് (ബൈന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് എറിത്രസൈറ്റുകൾ) കാരണമാകും44,45; മൾട്ടിലോബഡ് ന്യൂക്ലിയുകൾ ഒന്നിലധികം ലോബുകളുള്ള ന്യൂക്ലിയർ മെംബ്രണിന്റെ പ്രോട്രഷനുകളാണ്46, അതേസമയം മറ്റ് എറിത്രോയിഡ് അസാധാരണത്വങ്ങൾ ന്യൂക്ലിയർ വൃക്കകൾ/ബ്ലെബുകൾ47 പോലുള്ള ഡിഎൻഎ ആംപ്ലിഫിക്കേഷനുമായി ബന്ധപ്പെട്ടിരിക്കാം. ന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് എറിത്രസൈറ്റുകളുടെ സാന്നിധ്യം ഓക്സിജൻ ഗതാഗതത്തിലെ തകരാറിനെ സൂചിപ്പിക്കാം, പ്രത്യേകിച്ച് മലിനമായ വെള്ളത്തിൽ48,49. അപ്പോപ്റ്റോസിസ് കോശ മരണത്തെ സൂചിപ്പിക്കുന്നു50.
സൈപ്പർമെത്രിന്റെ ജനിതക വിഷാംശം സംബന്ധിച്ച മറ്റ് പഠനങ്ങളും തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്. ഉയർന്ന സാന്ദ്രതയിലുള്ള സൈപ്പർമെത്രിന് (5000 ഉം 10,000 μg L−1) 96 മണിക്കൂർ എക്സ്പോഷർ ചെയ്തതിനുശേഷം ഓഡോന്റോഫ്രൈനസ് അമേരിക്കാനസ് കോശങ്ങളിൽ ബൈന്യൂക്ലിയേറ്റഡ് സെല്ലുകൾ, അപ്പോപ്‌ടൈറ്റിക് സെല്ലുകൾ തുടങ്ങിയ മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയറുകളുടെയും ന്യൂക്ലിയർ മാറ്റങ്ങളുടെയും സാന്നിധ്യം കബാന തുടങ്ങിയവർ 51 തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ട്. പി. ബിലിഗോണിഗെറസ്52, റിനെല്ല അരേനരം53 എന്നിവയിലും സൈപ്പർമെത്രിൻ-ഇൻഡ്യൂസ്ഡ് അപ്പോപ്‌ടോസിസ് കണ്ടെത്തി. സൈപ്പർമെത്രിൻ വിവിധ ജലജീവികളിൽ ജനിതക വിഷ ഇഫക്റ്റുകൾ ഉണ്ടെന്നും MN, ENA അസ്സേ ഉഭയജീവികളിൽ സബ്ലെത്തൽ ഇഫക്റ്റുകളുടെ സൂചകമായിരിക്കാമെന്നും ഇത് തദ്ദേശീയ ജീവിവർഗങ്ങൾക്കും വിഷവസ്തുക്കളുമായി സമ്പർക്കം പുലർത്തുന്ന വന്യജീവികൾക്കും ബാധകമാകുമെന്നും ഈ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
സൈപ്പർമെത്രിന്റെ വാണിജ്യ ഫോർമുലേഷനുകൾ ഉയർന്ന പാരിസ്ഥിതിക അപകടമുണ്ടാക്കുന്നു (അക്യൂട്ട്, ക്രോണിക് എന്നിവ രണ്ടും). HQ-കൾ US പരിസ്ഥിതി സംരക്ഷണ ഏജൻസിയുടെ (EPA) ലെവൽ54 കവിയുന്നു, പരിസ്ഥിതിയിൽ ഉണ്ടെങ്കിൽ അത് ജീവിവർഗങ്ങളെ പ്രതികൂലമായി ബാധിച്ചേക്കാം. ക്രോണിക് റിസ്ക് അസസ്മെന്റിൽ, മരണനിരക്കിന്റെ NOEC 3 μg L−1 ആയിരുന്നു, ഇത് വെള്ളത്തിൽ കാണപ്പെടുന്ന സാന്ദ്രത ജീവിവർഗങ്ങൾക്ക് അപകടമുണ്ടാക്കുമെന്ന് സ്ഥിരീകരിക്കുന്നു55. എൻഡോസൾഫാൻ, സൈപ്പർമെത്രിൻ എന്നിവയുടെ മിശ്രിതവുമായി സമ്പർക്കം പുലർത്തിയ R. അരീനരം ലാർവകളുടെ മാരകമായ NOEC 168 മണിക്കൂറിനുശേഷം 500 μg L−1 ആയിരുന്നു; ഈ മൂല്യം 336 മണിക്കൂറിനുശേഷം 0.0005 μg L−1 ആയി കുറഞ്ഞു. എക്സ്പോഷർ ദൈർഘ്യം കൂടുന്തോറും സ്പീഷിസുകൾക്ക് ദോഷകരമായ സാന്ദ്രത കുറയുമെന്ന് രചയിതാക്കൾ കാണിക്കുന്നു. ഒരേ എക്സ്പോഷർ സമയത്ത് NOEC മൂല്യങ്ങൾ P. ഗ്രാസിലിസിന്റെതിനേക്കാൾ കൂടുതലായിരുന്നുവെന്ന് എടുത്തുകാണിക്കേണ്ടതും പ്രധാനമാണ്, ഇത് സൈപ്പർമെത്രിനോട് സ്പീഷിസ് പ്രതികരണം സ്പീഷിസ്-നിർദ്ദിഷ്ടമാണെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. കൂടാതെ, മരണനിരക്കിന്റെ കാര്യത്തിൽ, സൈപ്പർമെത്രിന് എക്സ്പോഷർ ചെയ്തതിനുശേഷം പി. ഗ്രാസിലിസിന്റെ CHQ മൂല്യം 64.67 ൽ എത്തി, ഇത് യുഎസ് പരിസ്ഥിതി സംരക്ഷണ ഏജൻസി നിശ്ചയിച്ച റഫറൻസ് മൂല്യത്തേക്കാൾ കൂടുതലാണ്54, കൂടാതെ ആർ. അരനാരം ലാർവകളുടെ CHQ മൂല്യവും ഈ മൂല്യത്തേക്കാൾ കൂടുതലാണ് (CHQ > 336 മണിക്കൂറിന് ശേഷം 388.00), ഇത് പഠനവിധേയമാക്കിയ കീടനാശിനികൾ നിരവധി ഉഭയജീവി ജീവികൾക്ക് ഉയർന്ന അപകടസാധ്യത സൃഷ്ടിക്കുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. പി. ഗ്രാസിലിസിന് രൂപാന്തരീകരണം പൂർത്തിയാക്കാൻ ഏകദേശം 30 ദിവസം ആവശ്യമാണ്56 എന്ന വസ്തുത കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ, സൈപ്പർമെത്രിന്റെ പഠനവിധേയമായ സാന്ദ്രത രോഗബാധിതരായ വ്യക്തികൾ ചെറുപ്രായത്തിൽ തന്നെ പ്രായപൂർത്തിയായ ഘട്ടത്തിലോ പ്രത്യുൽപാദന ഘട്ടത്തിലോ പ്രവേശിക്കുന്നത് തടയുന്നതിലൂടെ ജനസംഖ്യ കുറയുന്നതിന് കാരണമായേക്കാമെന്ന് നിഗമനം ചെയ്യാം.
മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസുകളുടെയും മറ്റ് എറിത്രോസൈറ്റ് ന്യൂക്ലിയർ അസാധാരണത്വങ്ങളുടെയും കണക്കാക്കിയ അപകടസാധ്യത വിലയിരുത്തലിൽ, CHQ മൂല്യങ്ങൾ 14.92 മുതൽ 97.00 വരെയായിരുന്നു, ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നത് സൈപ്പർമെത്രിന് അതിന്റെ സ്വാഭാവിക ആവാസ വ്യവസ്ഥയിൽ പോലും പി. ഗ്രാസിലിസിനെതിരെ ജനിതക വിഷബാധയുണ്ടാകാനുള്ള സാധ്യതയുണ്ടെന്നാണ്. മരണനിരക്ക് കണക്കിലെടുക്കുമ്പോൾ, പി. ഗ്രാസിലിസിനെതിരെ സഹിക്കാവുന്ന സെനോബയോട്ടിക് സംയുക്തങ്ങളുടെ പരമാവധി സാന്ദ്രത 4.24 μg L−1 ആയിരുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, 1 μg/L വരെ കുറഞ്ഞ സാന്ദ്രതയും ജനിതക വിഷബാധയുണ്ടാക്കുന്ന ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചു. ഈ വസ്തുത അസാധാരണമായ വ്യക്തികളുടെ എണ്ണത്തിൽ വർദ്ധനവിന് കാരണമായേക്കാം57, കൂടാതെ അവയുടെ ആവാസ വ്യവസ്ഥകളിലെ ജീവിവർഗങ്ങളുടെ വികാസത്തെയും പുനരുൽപാദനത്തെയും ബാധിക്കുകയും, ഉഭയജീവികളുടെ ജനസംഖ്യ കുറയുന്നതിന് കാരണമാവുകയും ചെയ്യും.
സൈപ്പർമെത്രിൻ എന്ന കീടനാശിനിയുടെ വാണിജ്യ ഫോർമുലേഷനുകളിൽ പി. ഗ്രാസിലിസിന് ഉയർന്ന അക്യൂട്ട്, ക്രോണിക് വിഷാംശം ഉണ്ടായിരുന്നു. വിഷാംശം മൂലമാകാം ഉയർന്ന മരണനിരക്ക് നിരീക്ഷിക്കപ്പെട്ടത്, പ്രത്യേകിച്ച് സെറേറ്റഡ് ന്യൂക്ലിയുകൾ, ലോബ്ഡ് ന്യൂക്ലിയുകൾ, വെസിക്കുലാർ ന്യൂക്ലിയുകൾ എന്നിവയുടെ സാന്നിധ്യം തെളിയിക്കുന്നതുപോലെ. കൂടാതെ, പഠിച്ച ജീവിവർഗങ്ങൾ അക്യൂട്ട്, ക്രോണിക് എന്നീ രണ്ട് പാരിസ്ഥിതിക അപകടസാധ്യതകൾ വർദ്ധിച്ചു. ഞങ്ങളുടെ ഗവേഷണ ഗ്രൂപ്പിന്റെ മുൻ പഠനങ്ങളുമായി സംയോജിപ്പിച്ച ഈ ഡാറ്റ, സൈപ്പർമെത്രിന്റെ വ്യത്യസ്ത വാണിജ്യ ഫോർമുലേഷനുകൾ പോലും അസറ്റൈൽകോളിനെസ്റ്ററേസ് (AChE), ബ്യൂട്ടൈറിൽകോളിനെസ്റ്ററേസ് (BChE) പ്രവർത്തനങ്ങൾ കുറയുന്നതിനും ഓക്സിഡേറ്റീവ് സമ്മർദ്ദത്തിനും കാരണമാകുമെന്ന് കാണിച്ചു, കൂടാതെ പി. ഗ്രാസിലിസിൽ നീന്തൽ പ്രവർത്തനത്തിലും വാക്കാലുള്ള വൈകല്യങ്ങളിലും മാറ്റങ്ങൾ വരുത്തി, സൈപ്പർമെത്രിന്റെ വാണിജ്യ ഫോർമുലേഷനുകൾക്ക് ഈ ജീവിവർഗത്തിന് ഉയർന്ന മാരകവും സബ്ലെത്തൽ വിഷാംശം ഉണ്ടെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഹാർട്ട്മാൻ തുടങ്ങിയവർ. മറ്റ് ഒമ്പത് കീടനാശിനികളുമായി താരതമ്യപ്പെടുത്തുമ്പോൾ, സൈപ്പർമെത്രിന്റെ വാണിജ്യ ഫോർമുലേഷനുകൾ പി. ഗ്രാസിലിസിനും അതേ ജനുസ്സിലെ മറ്റൊരു സ്പീഷീസിനും (പി. കുവിയേരി) ഏറ്റവും വിഷാംശം ഉള്ളതാണെന്ന് 60 കണ്ടെത്തി. പരിസ്ഥിതി സംരക്ഷണത്തിനായി നിയമപരമായി അംഗീകരിച്ച സൈപ്പർമെത്രിന്റെ സാന്ദ്രത ഉയർന്ന മരണനിരക്കും ദീർഘകാല ജനസംഖ്യാ കുറവും ഉണ്ടാക്കിയേക്കാമെന്ന് ഇത് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
പരിസ്ഥിതിയിൽ കാണപ്പെടുന്ന സാന്ദ്രത ഉയർന്ന മരണത്തിന് കാരണമാവുകയും പി. ഗ്രാസിലിസിന് സാധ്യതയുള്ള അപകടസാധ്യത ഉണ്ടാക്കുകയും ചെയ്യുന്നതിനാൽ, ഉഭയജീവികൾക്ക് കീടനാശിനിയുടെ വിഷാംശം വിലയിരുത്തുന്നതിന് കൂടുതൽ പഠനങ്ങൾ ആവശ്യമാണ്. ഉഭയജീവികളെക്കുറിച്ചുള്ള ഗവേഷണം പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കപ്പെടണം, കാരണം ഈ ജീവികളെക്കുറിച്ചുള്ള വിവരങ്ങൾ, പ്രത്യേകിച്ച് ബ്രസീലിയൻ സ്പീഷീസുകളെക്കുറിച്ചുള്ള വിവരങ്ങൾ വിരളമാണ്.
സ്ഥിരമായ സാഹചര്യങ്ങളിൽ ക്രോണിക് ടോക്സിസിറ്റി ടെസ്റ്റ് 168 മണിക്കൂർ (7 ദിവസം) നീണ്ടുനിന്നു, സബ്ലെത്തൽ സാന്ദ്രതകൾ ഇവയായിരുന്നു: 1, 3, 6, 20 μg ai L−1. രണ്ട് പരീക്ഷണങ്ങളിലും, ഒരു ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പിലെ 10 ടാഡ്‌പോളുകളെ ആറ് പകർപ്പുകൾ ഉപയോഗിച്ച് വിലയിരുത്തി, ഓരോ സാന്ദ്രതയിലും ആകെ 60 ടാഡ്‌പോളുകൾ. അതേസമയം, വെള്ളം മാത്രമുള്ള ചികിത്സ നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണമായി വർത്തിച്ചു. ഓരോ പരീക്ഷണ സജ്ജീകരണത്തിലും 500 മില്ലി ശേഷിയുള്ളതും 50 മില്ലി ലായനിയിൽ 1 ടാഡ്‌പോൾ സാന്ദ്രതയുമുള്ള ഒരു അണുവിമുക്തമായ ഗ്ലാസ് ഡിഷ് ഉണ്ടായിരുന്നു. ബാഷ്പീകരണം തടയാൻ ഫ്ലാസ്ക് പോളിയെത്തിലീൻ ഫിലിം കൊണ്ട് മൂടുകയും തുടർച്ചയായി വായുസഞ്ചാരം നൽകുകയും ചെയ്തു.
0, 96, 168 മണിക്കൂറുകളിൽ കീടനാശിനി സാന്ദ്രത നിർണ്ണയിക്കാൻ ജലത്തെ രാസപരമായി വിശകലനം ചെയ്തു. സാബിൻ തുടങ്ങിയവർ 68 ഉം മാർട്ടിൻസ് തുടങ്ങിയവർ 69 ഉം പറയുന്നതനുസരിച്ച്, ട്രിപ്പിൾ ക്വാഡ്രുപോൾ മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രിയുമായി (വേരിയൻ മോഡൽ 1200, പാലോ ആൾട്ടോ, കാലിഫോർണിയ, യുഎസ്എ) ഗ്യാസ് ക്രോമാറ്റോഗ്രാഫി സംയോജിപ്പിച്ച് സാന്താ മരിയ ഫെഡറൽ യൂണിവേഴ്സിറ്റിയിലെ പെസ്റ്റിസൈഡ് അനാലിസിസ് ലബോറട്ടറിയിൽ (LARP) വിശകലനങ്ങൾ നടത്തി. വെള്ളത്തിലെ കീടനാശിനികളുടെ അളവ് നിർണ്ണയിക്കൽ അനുബന്ധ വസ്തുവായി കാണിച്ചിരിക്കുന്നു (പട്ടിക SM1).
മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസ് ടെസ്റ്റ് (MNT), റെഡ് സെൽ ന്യൂക്ലിയർ അബ്നോർമാലിറ്റി ടെസ്റ്റ് (RNA) എന്നിവയ്ക്കായി, ഓരോ ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പിൽ നിന്നുമുള്ള 15 ടാഡ്‌പോളുകളെ വിശകലനം ചെയ്തു. 5% ലിഡോകെയ്ൻ (50 mg g-170) ഉപയോഗിച്ച് ടാഡ്‌പോളുകളെ അനസ്തേഷ്യ ചെയ്തു, ഡിസ്പോസിബിൾ ഹെപ്പാരിനൈസ്ഡ് സിറിഞ്ചുകൾ ഉപയോഗിച്ച് കാർഡിയാക് പഞ്ചർ വഴി രക്ത സാമ്പിളുകൾ ശേഖരിച്ചു. അണുവിമുക്തമായ മൈക്രോസ്കോപ്പ് സ്ലൈഡുകളിൽ രക്ത സ്മിയറുകൾ തയ്യാറാക്കി, വായുവിൽ ഉണക്കി, 100% മെഥനോൾ (4 °C) ഉപയോഗിച്ച് 2 മിനിറ്റ് ഉറപ്പിച്ചു, തുടർന്ന് 10% ഗീംസ ലായനി ഉപയോഗിച്ച് 15 മിനിറ്റ് ഇരുട്ടിൽ സ്റ്റെയിൻ ചെയ്തു. പ്രക്രിയയുടെ അവസാനം, അധിക കറ നീക്കം ചെയ്യുന്നതിനായി സ്ലൈഡുകൾ വാറ്റിയെടുത്ത വെള്ളത്തിൽ കഴുകി മുറിയിലെ താപനിലയിൽ ഉണക്കി.
ഓരോ ടാഡ്‌പോളിൽ നിന്നുമുള്ള കുറഞ്ഞത് 1000 ആർ‌ബി‌സികളെ 100× മൈക്രോസ്കോപ്പ് ഉപയോഗിച്ച് MN, ENA എന്നിവയുടെ സാന്നിധ്യം നിർണ്ണയിക്കുക എന്ന 71 ലക്ഷ്യത്തോടെ വിശകലനം ചെയ്തു. സൈപ്പർമെത്രിൻ സാന്ദ്രതയും നിയന്ത്രണങ്ങളും കണക്കിലെടുത്ത് ടാഡ്‌പോളുകളിൽ നിന്നുള്ള ആകെ 75,796 ആർ‌ബി‌സികളെ വിലയിരുത്തി. കരാസ്കോ തുടങ്ങിയവരുടെയും ഫെനെക് തുടങ്ങിയവരുടെയും രീതി അനുസരിച്ച് ഇനിപ്പറയുന്ന ന്യൂക്ലിയർ നിഖേദങ്ങളുടെ ആവൃത്തി നിർണ്ണയിച്ചുകൊണ്ട് ജെനോടോക്സിസിറ്റി വിശകലനം ചെയ്തു: (1) ന്യൂക്ലിയേറ്റ് കോശങ്ങൾ: ന്യൂക്ലിയസുകളില്ലാത്ത കോശങ്ങൾ; (2) അപ്പോപ്‌ടോട്ടിക് കോശങ്ങൾ: ന്യൂക്ലിയർ ഫ്രാഗ്മെന്റേഷൻ, പ്രോഗ്രാം ചെയ്ത സെൽ ഡെത്ത്; (3) ബൈന്യൂക്ലിയേറ്റ് കോശങ്ങൾ: രണ്ട് ന്യൂക്ലിയസുകളുള്ള കോശങ്ങൾ; (4) ന്യൂക്ലിയർ ബഡുകൾ അല്ലെങ്കിൽ ബ്ലെബ് സെല്ലുകൾ: ന്യൂക്ലിയർ മെംബ്രണിന്റെ ചെറിയ പ്രോട്രഷനുകളുള്ള ന്യൂക്ലിയസുകളുള്ള കോശങ്ങൾ, മൈക്രോ ന്യൂക്ലിയസുകൾക്ക് സമാനമായ വലിപ്പമുള്ള ബ്ലെബുകൾ; (5) കാരിയോളിസ്ഡ് കോശങ്ങൾ: ആന്തരിക വസ്തുക്കളില്ലാതെ ന്യൂക്ലിയസിന്റെ രൂപരേഖ മാത്രമുള്ള കോശങ്ങൾ; (6) നോച്ച്ഡ് കോശങ്ങൾ: ആകൃതിയിൽ വ്യക്തമായ വിള്ളലുകളോ നോച്ചുകളോ ഉള്ള ന്യൂക്ലിയസുകളുള്ള കോശങ്ങൾ, വൃക്ക ആകൃതിയിലുള്ള ന്യൂക്ലിയസ് എന്നും അറിയപ്പെടുന്നു; (7) ലോബുലേറ്റഡ് കോശങ്ങൾ: മുകളിൽ പറഞ്ഞ വെസിക്കിളുകളേക്കാൾ വലിയ ന്യൂക്ലിയർ പ്രോട്രഷനുകളുള്ള കോശങ്ങൾ; (8) മൈക്രോകോശങ്ങൾ: ഘനീഭവിച്ച ന്യൂക്ലിയസുകളും കുറഞ്ഞ സൈറ്റോപ്ലാസവും ഉള്ള കോശങ്ങൾ. നെഗറ്റീവ് നിയന്ത്രണ ഫലങ്ങളുമായി മാറ്റങ്ങൾ താരതമ്യം ചെയ്തു.
അക്യൂട്ട് ടോക്സിസിറ്റി ടെസ്റ്റ് ഫലങ്ങൾ (LC50) GBasic സോഫ്റ്റ്‌വെയറും TSK-ട്രിംഡ് സ്പിയർമാൻ-കാർബർ രീതിയും ഉപയോഗിച്ച് വിശകലനം ചെയ്തു74. ക്രോണിക് ടെസ്റ്റ് ഡാറ്റയിൽ പിശക് സാധാരണത്വത്തിനും (ഷാപ്പിറോ-വിൽക്സ്) വേരിയൻസിന്റെ ഏകതയ്ക്കും (ബാർട്ട്ലെറ്റ്) മുൻകൂട്ടി പരിശോധന നടത്തി. വൺ-വേ അനാലിസിസ് ഓഫ് വേരിയൻസ് (ANOVA) ഉപയോഗിച്ചാണ് ഫലങ്ങൾ വിശകലനം ചെയ്തത്. ടുക്കിയുടെ ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് ഡാറ്റ പരസ്പരം താരതമ്യം ചെയ്യാൻ ഉപയോഗിച്ചു, കൂടാതെ ചികിത്സാ ഗ്രൂപ്പിനും നെഗറ്റീവ് കൺട്രോൾ ഗ്രൂപ്പിനും ഇടയിലുള്ള ഡാറ്റ താരതമ്യം ചെയ്യാൻ ഡണറ്റിന്റെ ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ചു.
ഡണറ്റിന്റെ പരിശോധന ഉപയോഗിച്ച് LOEC, NOEC ഡാറ്റ വിശകലനം ചെയ്തു. 95% (p < 0.05) എന്ന സിഗ്നിഫിക്കൻസ് ലെവലിൽ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്ക 8.0 സോഫ്റ്റ്‌വെയർ (സ്റ്റാറ്റ്‌സോഫ്റ്റ്) ഉപയോഗിച്ചാണ് സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ പരിശോധനകൾ നടത്തിയത്.