ക്രോമാറ്റിനുമായി ഹിസ്റ്റോൺ H2A യുടെ ബന്ധം പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ, അറബിഡോപ്സിസിലെ മാസ്റ്റർ ഗ്രോത്ത് റെഗുലേറ്ററായ DELLA യെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സജീവമാക്കുന്നു.

ഡെല്ല പ്രോട്ടീനുകൾ സംരക്ഷിത മാസ്റ്ററാണ്വളർച്ചാ നിയന്ത്രണ ഉപകരണങ്ങൾആന്തരികവും പാരിസ്ഥിതികവുമായ സൂചനകൾക്കുള്ള പ്രതികരണമായി സസ്യ വികസനം നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ അവ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു. DELLA ഒരു ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ റെഗുലേറ്ററായി പ്രവർത്തിക്കുന്നു, കൂടാതെ അതിന്റെ GRAS ഡൊമെയ്ൻ വഴി ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങൾ (TFs), ഹിസ്റ്റോൺ H2A എന്നിവയുമായി ബന്ധിപ്പിച്ച് ടാർഗെറ്റ് പ്രൊമോട്ടർമാരിലേക്ക് റിക്രൂട്ട് ചെയ്യപ്പെടുന്നു. സമീപകാല പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് DELLA സ്ഥിരത രണ്ട് സംവിധാനങ്ങളിലൂടെ പോസ്റ്റ്-ട്രാൻസ്ലേഷണൽ ആയി നിയന്ത്രിക്കപ്പെടുന്നു എന്നാണ്: ഫൈറ്റോഹോർമോൺ ഗിബ്ബെറെല്ലിൻ പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന പോളിയുബിക്വിറ്റിനേഷൻ, ഇത് അതിന്റെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ഡീഗ്രേഡേഷനിലേക്ക് നയിക്കുന്നു, കൂടാതെ അതിന്റെ ശേഖരണം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നതിന് ചെറിയ യൂബിക്വിറ്റിൻ പോലുള്ള മോഡിഫയറുകളുടെ (SUMO) സംയോജനം. കൂടാതെ, DELLA പ്രവർത്തനം രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ഗ്ലൈക്കോസിലേഷനുകളാൽ ചലനാത്മകമായി നിയന്ത്രിക്കപ്പെടുന്നു: DELLA-TF പ്രതിപ്രവർത്തനം O-ഫ്യൂക്കോസിലേഷൻ വഴി മെച്ചപ്പെടുത്തുന്നു, പക്ഷേ O-ലിങ്ക്ഡ് N-അസെറ്റൈൽഗ്ലൂക്കോസാമൈൻ (O-GlcNAc) പരിഷ്കരണത്താൽ തടയപ്പെടുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, DELLA ഫോസ്ഫോറിലേഷന്റെ പങ്ക് വ്യക്തമല്ല, കാരണം മുൻ പഠനങ്ങൾ പരസ്പരവിരുദ്ധമായ ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചിട്ടുണ്ട്, ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ DELLA ഡീഗ്രേഡേഷനെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയോ കുറയ്ക്കുകയോ ചെയ്യുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്നവയിൽ നിന്ന് ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ അതിന്റെ സ്ഥിരതയെ ബാധിക്കുന്നില്ലെന്ന് കാണിക്കുന്നവയിലേക്ക്. ഇവിടെ, REPRESSOR-ൽ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സൈറ്റുകൾ ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിയുന്നു.ഗ1-3(RGA, AtDELLA) മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി വിശകലനം വഴി അറബിഡോപ്സിസ് താലിയാനയിൽ നിന്ന് ശുദ്ധീകരിച്ചു, പോളിഎസ്, പോളിഎസ്/ടി മേഖലകളിലെ രണ്ട് RGA പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ H2A ബൈൻഡിംഗും മെച്ചപ്പെട്ട RGA പ്രവർത്തനവും പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്നു. ലക്ഷ്യ പ്രൊമോട്ടറുകളുമായുള്ള RGA യുടെ ബന്ധം. ശ്രദ്ധേയമായി, ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ RGA-TF ഇടപെടലുകളെയോ RGA സ്ഥിരതയെയോ ബാധിക്കുന്നില്ല. ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ DELLA പ്രവർത്തനത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന തന്മാത്രാ സംവിധാനം ഞങ്ങളുടെ പഠനം വെളിപ്പെടുത്തുന്നു.
ഡെല്ല ഫംഗ്ഷനെ നിയന്ത്രിക്കുന്നതിൽ ഫോസ്ഫോറിലേഷന്റെ പങ്ക് വ്യക്തമാക്കുന്നതിന്, ഇൻ വിവോയിൽ ഡെല്ല ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സൈറ്റുകൾ തിരിച്ചറിയുകയും സസ്യങ്ങളിൽ പ്രവർത്തനപരമായ വിശകലനങ്ങൾ നടത്തുകയും ചെയ്യേണ്ടത് നിർണായകമാണ്. സസ്യ സത്തകളുടെ അഫിനിറ്റി ശുദ്ധീകരണവും തുടർന്ന് MS/MS വിശകലനവും വഴി, RGA-യിലെ നിരവധി ഫോസ്ഫോസൈറ്റുകൾ ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിഞ്ഞു. GA കുറവുള്ള സാഹചര്യങ്ങളിൽ, RHA ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ വർദ്ധിക്കുന്നു, പക്ഷേ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ അതിന്റെ സ്ഥിരതയെ ബാധിക്കുന്നില്ല. പ്രധാനമായും, RGA-യുടെ പോളിഎസ്/ടി മേഖലയിലെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ H2A യുമായുള്ള അതിന്റെ പ്രതിപ്രവർത്തനത്തെയും ലക്ഷ്യ പ്രൊമോട്ടറുകളുമായുള്ള അതിന്റെ ബന്ധത്തെയും പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് കോ-ഐപി, ചിഐപി-ക്യുപിസിആർ പരിശോധനകൾ വെളിപ്പെടുത്തി, ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ RGA ഫംഗ്ഷനെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന സംവിധാനം വെളിപ്പെടുത്തുന്നു.
LHR1 സബ്ഡൊമെയ്‌നിന്റെ TF-യുമായുള്ള പ്രതിപ്രവർത്തനത്തിലൂടെ ക്രോമാറ്റിനെ ലക്ഷ്യം വയ്ക്കുന്നതിനായി RGA റിക്രൂട്ട് ചെയ്യപ്പെടുന്നു, തുടർന്ന് അതിന്റെ PolyS/T മേഖല, PFYRE സബ്ഡൊമെയ്‌ൻ എന്നിവയിലൂടെ H2A-യുമായി ബന്ധിപ്പിക്കപ്പെടുന്നു, ഇത് RGA-യെ സ്ഥിരപ്പെടുത്തുന്നതിനായി H2A-RGA-TF സമുച്ചയം രൂപപ്പെടുത്തുന്നു. തിരിച്ചറിയപ്പെടാത്ത ഒരു കൈനേസ് ഉപയോഗിച്ച് DELLA ഡൊമെയ്‌നും GRAS ഡൊമെയ്‌നും ഇടയിലുള്ള PolyS/T മേഖലയിൽ Pep 2 ന്റെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ RGA-H2A ബൈൻഡിംഗ് വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. rgam2A മ്യൂട്ടന്റ് പ്രോട്ടീൻ RGA ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ഇല്ലാതാക്കുകയും H2A ബൈൻഡിംഗിനെ തടസ്സപ്പെടുത്തുന്നതിന് വ്യത്യസ്തമായ ഒരു പ്രോട്ടീൻ കോൺഫോർമേഷൻ സ്വീകരിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ഇത് ക്ഷണികമായ TF-rgam2A ഇടപെടലുകളുടെ അസ്ഥിരതയ്ക്കും ടാർഗെറ്റ് ക്രോമാറ്റിനിൽ നിന്ന് rgam2A യുടെ വിഘടനത്തിനും കാരണമാകുന്നു. ഈ ചിത്രം RGA-മധ്യസ്ഥതയുള്ള ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ അടിച്ചമർത്തലിനെ മാത്രമേ ചിത്രീകരിക്കുന്നുള്ളൂ. H2A-RGA-TF സമുച്ചയം ടാർഗെറ്റ് ജീൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷനെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയും rgam2A യുടെ ഡീഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുമെന്നതൊഴിച്ചാൽ, RGA-മധ്യസ്ഥതയുള്ള ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ ആക്റ്റിവേഷനും സമാനമായ ഒരു പാറ്റേൺ വിവരിക്കാം. ഹുവാങ് തുടങ്ങിയവർ 21-ൽ നിന്ന് പരിഷ്കരിച്ച ചിത്രം.
എല്ലാ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ഡാറ്റയും എക്സൽ ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ ആയി വിശകലനം ചെയ്തു, സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു. സാമ്പിൾ വലുപ്പം പ്രാഥമികമായി നിർണ്ണയിക്കാൻ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ രീതികളൊന്നും ഉപയോഗിച്ചിട്ടില്ല. വിശകലനത്തിൽ നിന്ന് ഒരു ഡാറ്റയും ഒഴിവാക്കിയിട്ടില്ല; പരീക്ഷണം ക്രമരഹിതമാക്കിയിട്ടില്ല; പരീക്ഷണ വേളയിൽ ഡാറ്റയുടെ വിതരണത്തിലും ഫലങ്ങളുടെ വിലയിരുത്തലിലും ഗവേഷകർ അന്ധരായിരുന്നില്ല. സാമ്പിൾ വലുപ്പം ഫിഗർ ലെജൻഡിലും ഉറവിട ഡാറ്റ ഫയലിലും സൂചിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു.
പഠന രൂപകൽപ്പനയെക്കുറിച്ചുള്ള കൂടുതൽ വിവരങ്ങൾക്ക്, ഈ ലേഖനവുമായി ബന്ധപ്പെട്ട നാച്ചുറൽ പോർട്ട്‌ഫോളിയോ റിപ്പോർട്ട് സംഗ്രഹം കാണുക.
PXD046004 എന്ന ഡാറ്റാസെറ്റ് ഐഡന്റിഫയറുള്ള PRIDE66 പങ്കാളി ശേഖരം വഴി മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി പ്രോട്ടിയോമിക്സ് ഡാറ്റ പ്രോട്ടീംഎക്സ്ചേഞ്ച് കൺസോർഷ്യത്തിലേക്ക് സംഭാവന ചെയ്തിട്ടുണ്ട്. ഈ പഠനത്തിനിടെ ലഭിച്ച മറ്റെല്ലാ ഡാറ്റയും സപ്ലിമെന്ററി ഇൻഫർമേഷൻ, സപ്ലിമെന്ററി ഡാറ്റ ഫയലുകൾ, റോ ഡാറ്റ ഫയലുകൾ എന്നിവയിൽ അവതരിപ്പിച്ചിരിക്കുന്നു. ഈ ലേഖനത്തിനായി ഉറവിട ഡാറ്റ നൽകിയിരിക്കുന്നു.