ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ മാസ്റ്റർ ഗ്രോത്ത് റെഗുലേറ്ററായ ഡെല്ലയെ സജീവമാക്കുന്നു, ഇത് അറബിഡോപ്സിസിൽ ക്രോമാറ്റിനുമായി ഹിസ്റ്റോൺ H2A ബൈൻഡിംഗ് പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നു.

ഡെല്ല പ്രോട്ടീനുകൾ സംരക്ഷിക്കപ്പെടുന്നു.വളർച്ചാ നിയന്ത്രണ ഉപകരണങ്ങൾആന്തരികവും ബാഹ്യവുമായ സിഗ്നലുകളോടുള്ള പ്രതികരണമായി സസ്യ വികസനത്തിൽ ഒരു പ്രധാന പങ്ക് വഹിക്കുന്നു. ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷണൽ റെഗുലേറ്ററുകൾ എന്ന നിലയിൽ, ഡെല്ലകൾ അവയുടെ GRAS ഡൊമെയ്‌നുകൾ വഴി ട്രാൻസ്ക്രിപ്ഷൻ ഘടകങ്ങളുമായും (TF-കൾ) ഹിസ്റ്റോൺ H2A-യുമായും ബന്ധിപ്പിക്കുകയും പ്രൊമോട്ടറുകളിൽ പ്രവർത്തിക്കാൻ നിയമിക്കപ്പെടുകയും ചെയ്യുന്നു. സമീപകാല പഠനങ്ങൾ കാണിക്കുന്നത് ഡെല്ല സ്ഥിരത രണ്ട് സംവിധാനങ്ങളാൽ വിവർത്തനത്തിനു ശേഷം നിയന്ത്രിക്കപ്പെടുന്നു എന്നാണ്: സസ്യ ഹോർമോൺ പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന പോളിയുബിക്വിറ്റിനേഷൻഗിബ്ബെറെലിൻ, ഇത് അവയുടെ ദ്രുതഗതിയിലുള്ള ഡീഗ്രഡേഷനിലേക്കും ചെറിയ യൂബിക്വിറ്റിൻ പോലുള്ള മോഡിഫയറുമായി (SUMO) സംയോജനത്തിലേക്കും നയിക്കുന്നു, ഇത് അവയുടെ ശേഖരണം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു. മാത്രമല്ല, DELLA പ്രവർത്തനം രണ്ട് വ്യത്യസ്ത ഗ്ലൈക്കോസൈലേഷൻ സംവിധാനങ്ങളാൽ ചലനാത്മകമായി നിയന്ത്രിക്കപ്പെടുന്നു: O-fucosylation DELLA-TF പ്രതിപ്രവർത്തനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നു, അതേസമയം O-ലിങ്ക്ഡ് N-അസെറ്റൈൽഗ്ലൂക്കോസാമൈൻ (O-GlcNAc) പരിഷ്കരണം DELLA-TF പ്രതിപ്രവർത്തനത്തെ തടയുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, മുൻ പഠനങ്ങൾ പരസ്പരവിരുദ്ധമായ ഫലങ്ങൾ കാണിച്ചതിനാൽ DELLA ഫോസ്ഫോറിലേഷന്റെ പങ്ക് വ്യക്തമല്ല, ചിലർ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ DELLA ഡീഗ്രഡേഷനെ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയോ അടിച്ചമർത്തുകയോ ചെയ്യുന്നുവെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുകയും മറ്റുചിലർ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ അവയുടെ സ്ഥിരതയെ ബാധിക്കുന്നില്ലെന്ന് നിർദ്ദേശിക്കുകയും ചെയ്യുന്നു. ഇവിടെ, മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി വഴി അറബിഡോപ്സിസ് താലിയാനയിൽ നിന്ന് ശുദ്ധീകരിച്ച GA1-3 റെപ്രസ്സർ (RGA), AtDELLA ലെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സൈറ്റുകൾ ഞങ്ങൾ തിരിച്ചറിയുന്നു, കൂടാതെ PolyS, PolyS/T മേഖലകളിലെ രണ്ട് RGA പെപ്റ്റൈഡുകളുടെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ H2A ബൈൻഡിംഗും ടാർഗെറ്റ് പ്രൊമോട്ടറുകളുമായുള്ള RGA ബന്ധവും പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുന്നതിലൂടെ RGA പ്രവർത്തനം വർദ്ധിപ്പിക്കുന്നുവെന്ന് കാണിക്കുന്നു. ശ്രദ്ധേയമായി, ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ RGA-TF ഇടപെടലുകളെയോ RGA സ്ഥിരതയെയോ ബാധിച്ചില്ല. ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ഡെല്ല പ്രവർത്തനത്തെ പ്രേരിപ്പിക്കുന്ന ഒരു തന്മാത്രാ സംവിധാനം ഞങ്ങളുടെ പഠനം വെളിപ്പെടുത്തുന്നു.
ഞങ്ങളുടെ മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രിക് വിശകലനം വെളിപ്പെടുത്തിയത്, GA-കുറഞ്ഞ Ga1 പശ്ചാത്തലത്തിൽ RGA-യിൽ Pep1 ഉം Pep2 ഉം ഉയർന്ന ഫോസ്ഫോറിലേറ്റ് ചെയ്യപ്പെട്ടിട്ടുണ്ടെന്നാണ്. ഈ പഠനത്തിന് പുറമേ, ഫോസ്ഫോപ്രോട്ടോമിക് പഠനങ്ങളും RGA-യിൽ Pep1 ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ വെളിപ്പെടുത്തിയിട്ടുണ്ട്, എന്നിരുന്നാലും അതിന്റെ പങ്ക് ഇതുവരെ പഠിച്ചിട്ടില്ല53,54,55. ഇതിനു വിപരീതമായി, RGAGKG ട്രാൻസ്ജീൻ ഉപയോഗിച്ച് മാത്രമേ ഈ പെപ്റ്റൈഡ് കണ്ടെത്താൻ കഴിയൂ എന്നതിനാൽ Pep2 ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ മുമ്പ് വിവരിച്ചിട്ടില്ല. Pep1 ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ഇല്ലാതാക്കിയ m1A മ്യൂട്ടേഷൻ, പ്ലാന്റയിലെ RGA പ്രവർത്തനത്തെ ചെറുതായി കുറച്ചെങ്കിലും, m2A-യുമായി സംയോജിപ്പിക്കുമ്പോൾ RGA പ്രവർത്തനം കുറയ്ക്കുന്നതിൽ ഇതിന് ഒരു സങ്കലന ഫലമുണ്ടായിരുന്നു (അനുബന്ധ ചിത്രം 6). പ്രധാനമായും, GA- മെച്ചപ്പെടുത്തിയ സ്ലൈ1 മ്യൂട്ടന്റിൽ Pep1 ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ ga1 നെ അപേക്ഷിച്ച് ഗണ്യമായി കുറഞ്ഞു, ഇത് GA RGA ഡീഫോസ്ഫോറിലേഷൻ പ്രോത്സാഹിപ്പിക്കുകയും അതിന്റെ പ്രവർത്തനം കുറയ്ക്കുകയും ചെയ്യുന്നുവെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു. GA RGA ഫോസ്ഫോറിലേഷനെ അടിച്ചമർത്തുന്ന സംവിധാനത്തിന് കൂടുതൽ അന്വേഷണം ആവശ്യമാണ്. തിരിച്ചറിയപ്പെടാത്ത ഒരു പ്രോട്ടീൻ കൈനേസിന്റെ നിയന്ത്രണത്തിലൂടെയാണ് ഇത് നേടാനാകുക എന്നതാണ് ഒരു സാധ്യത. അരിയിൽ GA വഴി CK1 പ്രോട്ടീൻ കൈനാസ് EL1 ന്റെ എക്സ്പ്രഷൻ കുറയ്ക്കുന്നതായി പഠനങ്ങൾ തെളിയിച്ചിട്ടുണ്ടെങ്കിലും41, അറബിഡോപ്സിസ് EL1 ഹോമോലോഗിന്റെ (AEL1-4) ഉയർന്ന ക്രമത്തിലുള്ള മ്യൂട്ടേഷനുകൾ RGA ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ കുറയ്ക്കുന്നില്ലെന്ന് ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങൾ സൂചിപ്പിക്കുന്നു. ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങളുമായി യോജിച്ച്, അറബിഡോപ്സിസ് AEL ഓവർഎക്സ്പ്രസ്സിംഗ് ലൈനുകളും ഒരു ael ട്രിപ്പിൾ മ്യൂട്ടന്റും ഉപയോഗിച്ചുള്ള ഒരു സമീപകാല ഫോസ്ഫോപ്രോട്ടോമിക് പഠനം ഈ കൈനാസുകളുടെ അടിവസ്ത്രങ്ങളായി ഏതെങ്കിലും DELLA പ്രോട്ടീനുകളെ തിരിച്ചറിഞ്ഞില്ല56. ഞങ്ങൾ കൈയെഴുത്തുപ്രതി തയ്യാറാക്കിയപ്പോൾ, ഗോതമ്പിൽ GSK3/SHAGGY പോലുള്ള കൈനാസിനെ എൻകോഡ് ചെയ്യുന്ന ജീൻ (Triticum aestivum) GSK3, DELLA (Rht-B1b)57 ഫോസ്ഫോറിലേറ്റ് ചെയ്യാൻ കഴിയുമെന്ന് റിപ്പോർട്ട് ചെയ്യപ്പെട്ടു, എന്നിരുന്നാലും GSK3 വഴി Rht-B1b യുടെ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ പ്ലാന്റയിൽ സ്ഥിരീകരിച്ചിട്ടില്ല. GSK3 യുടെ സാന്നിധ്യത്തിൽ ഇൻ വിട്രോ എൻസൈമാറ്റിക് പ്രതികരണങ്ങളും മാസ് സ്പെക്ട്രോമെട്രി വിശകലനവും Rht-B1b യുടെ DELLA, GRAS ഡൊമെയ്‌നുകൾക്കിടയിൽ സ്ഥിതിചെയ്യുന്ന മൂന്ന് ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സൈറ്റുകൾ വെളിപ്പെടുത്തി (അനുബന്ധ ചിത്രം 3). മൂന്ന് ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ സൈറ്റുകളിലും സെറിൻ മുതൽ അലനൈൻ വരെ പകരമുള്ളത് ട്രാൻസ്ജെനിക് ഗോതമ്പിൽ Rht-B1b പ്രവർത്തനം കുറയുന്നതിന് കാരണമായി, ഇത് Pep2 RGA-യിലെ അലനൈൻ പകരമുള്ളത് RGA പ്രവർത്തനം കുറയ്ക്കുമെന്ന ഞങ്ങളുടെ കണ്ടെത്തലുകളുമായി പൊരുത്തപ്പെടുന്നു. എന്നിരുന്നാലും, ഇൻ വിട്രോ പ്രോട്ടീൻ ഡീഗ്രഡേഷൻ പരിശോധനകൾ ഫോസ്ഫോറിലേഷനും Rht-B1b57 സ്ഥിരപ്പെടുത്താൻ കഴിയുമെന്ന് തെളിയിച്ചു. Pep2 RGA-യിലെ അലനൈൻ പകരമുള്ളത് പ്ലാന്റയിൽ അതിന്റെ സ്ഥിരതയെ മാറ്റുന്നില്ലെന്ന് കാണിക്കുന്ന ഞങ്ങളുടെ ഫലങ്ങളിൽ നിന്ന് ഇത് വ്യത്യസ്തമാണ്. ഗോതമ്പിലെ GSK3 അറബിഡോപ്സിസ് 57-ൽ ബ്രാസിനോസ്റ്റീറോയിഡ്-ഇൻസെൻസിറ്റീവ് പ്രോട്ടീൻ 2 (BIN2) ന്റെ ഒരു ഓർത്തോലോഗാണ്. BR സിഗ്നലിംഗിന്റെ ഒരു നെഗറ്റീവ് റെഗുലേറ്ററാണ് BIN2, കൂടാതെ BR BIN2 ഡീഗ്രഡേഷൻ 58 ഉണ്ടാക്കുന്നതിലൂടെ അതിന്റെ സിഗ്നലിംഗ് പാത സജീവമാക്കുന്നു. അറബിഡോപ്സിസിൽ BR ചികിത്സ RGA സ്ഥിരത 59 അല്ലെങ്കിൽ ഫോസ്ഫോറിലേഷൻ അളവ് കുറയ്ക്കുന്നില്ലെന്ന് ഞങ്ങൾ കാണിച്ചു (സപ്ലിമെന്ററി ചിത്രം 2), ഇത് BIN2 വഴി RGA ഫോസ്ഫോറിലേറ്റ് ചെയ്യപ്പെടാൻ സാധ്യതയില്ലെന്ന് സൂചിപ്പിക്കുന്നു.
എല്ലാ ക്വാണ്ടിറ്റേറ്റീവ് ഡാറ്റയും എക്സൽ ഉപയോഗിച്ച് സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ ആയി വിശകലനം ചെയ്തു, സ്റ്റുഡന്റ്സ് ടി-ടെസ്റ്റ് ഉപയോഗിച്ച് കാര്യമായ വ്യത്യാസങ്ങൾ നിർണ്ണയിച്ചു. സാമ്പിൾ വലുപ്പം മുൻകൂട്ടി നിർണ്ണയിക്കാൻ സ്റ്റാറ്റിസ്റ്റിക്കൽ രീതികളൊന്നും ഉപയോഗിച്ചിട്ടില്ല. വിശകലനത്തിൽ നിന്ന് ഒരു ഡാറ്റയും ഒഴിവാക്കിയിട്ടില്ല; പരീക്ഷണം ക്രമരഹിതമാക്കിയിട്ടില്ല; പരീക്ഷണത്തിന്റെയും ഫല വിലയിരുത്തലിന്റെയും സമയത്ത് ഗവേഷകർക്ക് വിഹിതത്തെക്കുറിച്ച് അറിയാമായിരുന്നു. ഫിഗർ ലെജൻഡുകളിലും റോ ഡാറ്റ ഫയലുകളിലും സാമ്പിൾ വലുപ്പങ്ങൾ നൽകിയിരിക്കുന്നു.